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本试剂盒采用基因工程改造的Poly A聚合酶，可为miRNA高效添加Poly A尾，以便于后续的RT反应。逆转录引物为特别设计的含有Oligo d(T)和Tag序列的引物，高度亲和含有Poly A尾的miRNA，使RT反应能够高效进行。DIOG miRNA探针法逆转录试剂盒拥有优异的RT效率，与百奥莱博DIOG miRNA探针法荧光定量PCR试剂盒（货号：ME0020）配套使用，可获得较染料法qPCR更加特异和敏感的实验结果。

• 基因工程优化的Poly A聚合酶，miRNA Poly A聚合高效快速；
  
• 特别设计的含Oligo d(T)的引物，能够与miRNA Poly A+高效结合，拥有优异的RT效率；
  
• 同一RNA一次RT可获得多个miRNA的RT产物，后续可进行多个miRNA的检测，节省样本用量；
  
• 配套DIOG microRNA探针法荧光定量PCR试剂使用，拥有较染料法qPCR更高的特异性和敏感度。

• 用于RT反应的器具和水应进行RNase灭活处理，操作人员应佩戴口罩、手套等，以防RNase污染。
  
• 模板RNA使用量：总RNA可在10pg～2μg之间。
  
• 试剂配制过程建议在碎冰上进行，DIOG RTase Mix粘度较大，应缓慢吸取，Tip头不要插入液体太深，以免粘染太多酶液。

• RNA加A尾：
  
  • 取RNase-free离心管，配制如下混合液。
    

    成分	用量
    RNase-free ddH2O	至20μL
    DIOG Poly A	1μL
    2×Poly A Buffer	10μL
    RNA	10pg～2μg

  • 轻轻混匀，37℃ 30min，迅速置于冰上。
• RT反应液配制：
  上述反应液在使用前5000rpm离心5s。
  

  成分	用量
  取上述反应液	8μL
  2×Taqman Buffer	10μL
  DIOG Taqman Mix	2μL

• 设置反转录程序：

  温度	时间
  25℃	5min
  50℃	15min
  85℃	5min

• 反应完毕后，5000rpm离心5s，尽快放于冰上，直接进行PCR反应。如暂时不用，请放置于-20℃以下温度，在半年内使用完毕，不要反复冻融。模板如具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃。